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金担子素A图片
产品货号:
TD0017
中文名称:
金担子素A ,97%
英文名称:
Aureobasidin A
产品规格:
5mg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
金担子素A是一种从丝状真菌Aureobasidium pullulans No.R106中分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1~0.5μg/ml)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A.niger.)。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1基因,以及构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性,如AUR1-C基因。AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。本品为溶于甲醇的AbA溶液,浓度为1mg/ml。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度。
基本信息
中文名称:巴西芬净A
英文名称:Aureobasidin A
别名:金担子素A
CAS No:127785-64-2
分子式:C60H92N8O11
分子量:1101.42
纯度:≥97%
操作步骤(抗AbA的酵母转化系统;仅供参考)
1)加入0.5mL过夜培养的酵母到50mL YPD培养基中(配方:1L液体培养基含有10g yeast extract,20g polypeptone,20g D-glucose;固体培养基另外加入2%琼脂;)。
2)30℃培养约6小时,测定OD660为1~2。使用二倍体时,测定OD660为2~4。
3)1000×g离心5分钟。
4)用10mL Solution A(配方:100mM Lithium acetate,10mM Tris-HCl pH7.5,1mM EDTA)悬浮沉淀,1000×g离心5分钟。
5)用Solution A重悬沉淀,直到OD660为150。
6)在管内分取100μL细胞悬浮液,30℃培养1小时。
7)加入5μg载体(环状或线性DNA)和150μg Carrier DNA(已经过100℃加热10分钟,并迅速冷却)。
注:pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。
8)加入850μL Solution B(配方:取40g Polyethylene Glycol 4000溶于100mL Solution A充分溶解,需要现用现配),轻轻混匀。
9)30℃培养30分钟后,42℃培养15分钟。
10)室温放置10分钟。
11)5000rpm离心1分钟,用5mL YPD培养基悬浮沉淀。
12)30℃培养6小时~过夜。
13)5,000~10000rpm离心,用1~10mL 0.9% NaCl悬浮沉淀。
14)在YPD选择培养基平板(含有一定浓度的AbA,依菌株类型而定)上接种100μL细胞悬液。30℃培养3~4天后转化完成。
15)挑取阳性转化子,和/或测定转化效率(以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示)。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)AbA的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异,可根据最低抑菌浓度(MIC)来确定。
保存:-20℃
相关搜索:金担子素A巴西芬净AAureobasidin A127785-64-2
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